Введение: Анализ MRL (максимального уровня остатков) бета-лактама Charm и RF тетрациклина является иммуно-рецепторным анализом, использующим технологию растекания капли жидкости в радиальном направлении ROSA® (Скоростной одностадийный анализ). Проба молока взаимодействует с окрашенными гранулами и интенсивность цвета в исследуемой зоне оценивают с помощью считывающего устройства ROSA. 2 минутный анализ MRL бета-лактама Charm и RF тетрациклина определяет бета-лактам при или ниже ЕС и CODEX MRL (максимальный уровень остатков) и тетрациклиновые лекарственные препараты при или ниже нормативных уровней при импорте в Российской Федерации. Исследование разработано для применения персоналом молочных заводов, приемных организаций, лабораторий, отраслевых учреждений и органов управления.
Требуемые материалы и медицинские инструменты:
Поставленные медицинские инструменты:
· Индикаторные полоски Charm MRLBLRFTET2.
· MRLBLTET/TET положительные таблетки (4 ppb пенициллина G и100 ppb окситетрациклина 100 ppb стандарт стрептомицина).
· Руководство для оператора.
Предметы одноразового использования:
· Наконечники пипеток или ROSA-пипетки.
Оборудование:
• Термостат ROSA (56°C)
• Считывающее устройство ROSA (EZ Reader or PEARL-X)
• Принтер (по усмотрению)
• Пипетка на 300 мкл (по усмотрению).
Чувствительность и избирательность (таблица):
|
Сырое молоко, свободное от бета-лактама и тетациклина дает отрицательные результаты при, по крайней мере, 99% времени.
|
|
Лекарственный препарат на основе бета-лактама |
Диапазон определения † (ppb) |
EС/CODEX MRL (максимальный уровень остатков) (ppb*) |
Лекарственный препарат на основе бета-лактама |
Диапазон определения (ppb) |
EС/CODEX MRL (максимальный уровень остатков) (ppb*) |
|
Амоксициклин |
От 4 до 6 |
4 |
Клоксациллин |
От 10 до 20 |
30 |
|
Ампициллин |
От 4 до 6 |
4 |
Диклоксациллин |
От 10 до 20 |
30 |
|
Цефацетрил |
От40 до 50 |
125 |
Пенициллин G |
От 2 до 3 |
4/4 |
|
Цефалониум |
От 3 до 5 |
20 |
Тетрациклиновый лекарственный препарат |
Диапазон определения † (ppb) |
Российский технический регламент‡ |
|
Цефазолин |
От 20 до 40 |
50 |
|
Цефоперазон |
От 3 до 5 |
50 |
|
Цефквин |
От 15 до 20 |
20 |
Хлортетрациклин‡ |
От 6 до 10 |
10 |
|
Цефтиофур и метаболит |
От 40 до 70 |
100/100 |
Доксициклин |
От 6 до 10 |
10 |
|
Окситетрациклин‡ |
От 6 до 10 |
10 |
|
Цефапирин |
От 6 до 10 |
60§ |
Тетрациклин‡ |
От 1 до 3 |
10 |
|
‡ Российский технический регламент по молоку и молочным продуктам. Федеральный закон № 88 FL 88 от 12 июня 2008 года. |
Приготовление пробы, долговременное хранение, предостережения:
· Хранят индикаторные полоски MRLBLRFTET2 и положительные таблетки охлажденными (как определено, при температуре от 0 до 7°C или от 0 до 4,4°C для лабораторий, лицензированных в США).
· Перемешивают пробу и замораживают аликвотные количества (по меньшей мере, 0,5 мл) в чистых ампулах.
· Контрольные пробы должны замораживаться в течение 6 часов после приготовления.
· Замораживают аликвотные количества при температуре -15°C или ниже вплоть до 2 месяцев.
· Размораживают медленно (всю ночь в холодильнике или с холодной водой) и хорошо встряхивают. Размороженная проба является стабильной в течение 24 часов в охлажденном состоянии. Заметное выпадение в осадок протеина выявляет непригодную пробу. Размороженную пробу выбрасывают. Не замораживают повторно.
· Пробы с высокой жирностью (выше, чем 6,5%) могут приводить к ложным результатам. Не считывайте несоответствующие индикаторные полоски в считывающем устройстве ROSA.
· Этот анализ неприменим к пастеризованному цельному молоку.
· Инородные частицы на индикаторных полосках могут влиять на оптическую систему считывающего устройства ROSA. Хранят оборудование чистым и удаляют пыль и молоко с индикаторных полосок перед введением в считывающее устройство ROSA.
· Термостат ROSA должен быть чистым и горизонтальным. Температура термостата ROSA должна быть 56 ± 1°C. Контрольно- измерительный прибор для температуры должен регулировать температуру термостата ROSA. Рекомендуют ежедневную проверку термометра. Держат крышку термостата ROSA опущенной, но незафиксированной, за исключением процедуры исполнения.
· Термостаты ROSA могут потребовать более 10 минут для достижения соответствующей температуры, в зависимости от температуры окружающей среды.
Хранение медицинских инструментов ROSA для анализа:
· Медицинские инструменты для анализа не требуют транспортировки в охлажденном состоянии или на льду.
· Хранят охлажденными, в плотно закрытом предусмотренном контейнере.
· Чтобы открыть, снимают и сохраняют пластиковую крышку с вкладышем из пенопласта с подкладкой из фольги для повторного запечатывания контейнера. Поднимают петлю из фольги и снимают уплотнение с прокладкой из фольги с контейнера. Выбрасывают уплотнение с прокладкой из фольги.
· При высокой влажности ограничивают конденсацию путем открывания контейнера после того, как его нагреют до комнатной температуры (от 20 до 30 минут с того времени, как контейнер удален из холодильника).
· Проверяют контрольно-измерительный прибор осушителя. Гранулы внутри пакетов осушителя должны быть голубыми. Не используют индикаторные полоски, если голубые гранулы превратились в пурпурные или розовые.
· Вынимают из контейнера количество индикаторных полосок, необходимое для использования в один день. Хранят эти индикаторные полоски при комнатной температуре во время ежедневного использования вплоть до 12 часов. Неиспользованные индикаторные полоски должны быть выброшены.
· Используют комплектные пластиковые крышки для немедленного герметичного повторного запечатывания контейнера и возвращают в холодильное хранилище.
Отрицательный контроль:
• Используют отрицательное сырое, смешанное молоко с бета-лактамом и с тетрациклином в качестве пробы отрицательного контроля для мониторинга проведения и воспроизводят положительный стандарт стрептомицина для положительного контроля. Не используйте пастерилизованное цельное молоко.
• Качественный отрицательный контроль должен давать сильный визуальный отрицательный результат BL и TE полосы темнее, чем C полоса. (Смотрите «Визуальная интерпретация».)
• Смотрите «Перепроверка первоначально положительной пробы» для спецификаций проведения отрицательного контроля.
• Проба отрицательного контроля может храниться до 72 часов охлажденным.
Положительный контроль:
· 2 минутный анализ бета-лактама Charm MRL и тетрациклина RF применяет положительную таблетку MRLBLTET/TET для получения положительного контроля 4 ± 0,4 ppb пенициллина G и 100 ± 20 ppb окситетрациклина для мониторинга проведения.
· Хранят положительные таблетки охлажденными в предусмотренных закрытых на молнию влагостойких мешках из фольги.
· Восстанавливают один стандарт с 5,0 мл отрицательного контроля (смотрите выше) и хорошо встряхивают. Позволяют постоять охлажденным или на льду в течение 5 минут и встряхивают перед применением.
· Восстановленный положительный контроль может храниться охлажденным вплоть до 48 часов.
Ежедневный мониторинг тестирования/Проверка калибровки:
· Калибровочные полоски ROSA предусмотрены для мониторинга функционирования считывающего устройства ROSA. Ежедневно и перед проведением перепроверки первоначально положительной пробы, проверяют функционирование считывающего устройства ROSA путем проверки того, что калибровочные полоски дают показания в пределах диапазона. Вводят режим функционирования в считывающее устройство ROSA путем нажатия ESC, 5, затем ENTER.
· Проверяют действие индикаторных полосок и оборудования каждый день путем проведения одного отрицательного контроля и одного положительного контроля до исследования настоящих образцов.
· Обращайтесь к «Перепроверка первоначально положительных проб» для контроля спецификаций проведения.
Методика анализа:
|
Проверяют, что температура термостата ROSA равна 56±1°C.
Применяют индикаторные полоски MRLBLRFTET2. Переоформляют зубчатые отделения пробы для приспособления в термостат ROSA. |
|
Шаг 1 |
· Хорошо перемешивают все пробы перед исследованием. |
|
Шаг 2 |
· Маркируют индикаторную полоску (и) с идентификацией пробы; индикаторная полоска (и) может быть помещена в термостат во избежание разрушения отделения пробы. |
|
Шаг 3 |
• Помещают индикаторную полоску в термостат ROSA.
• Держа индикаторную полоску плашмя в термостате ROSA, применяют петлю для воздействия на отделение пробы путем снятия ленты до линии“Peel to Here”.
• Избегайте поднятия индикаторной полоски и впитывания под полоской. |
|
Шаг 4 |
· Используя пипетку на 300 мкл, отбирают пробу, избегая пены и пузырей.
· Держа пипетку вертикально, медленно капают 300 мкл (± 15 мкл) пробы в отделение для пробы на индикаторной линии термостата ROSA (как показано). |
|
Шаг 5 |
• Вновь запечатывают липкой лентой поверх отделения для пробы.
• При проведении многочисленных испытаний в термостате ROSA:
o Очищают, капают из пипетки и вновь запечатывают перед началом следующей индикаторной полоски.
o Завершают операции со всеми индикаторными полосками в течение 1 минуты. |
|
Шаг 6 |
· Закрывают крышку на термостате ROSA и фиксируют. Таймер начинает работать и загорается красный свет. |
|
Шаг 7 |
· Термостатируют в течение 8 минут, но не более 10 минут.
· При 2 минутах, запускаются бипер и поочередно мигающий желтый и красный свет. |
|
|
Шаг 8 |
• Удаляют индикаторную полоску(и) из термостата ROSA. Не давят на отделение для пробы. Держат индикаторную полоску с отделением для пробы в нижнем положении до окончания интерпретации.
· Опускают крышку. Не фиксируют повторно. |
Интерпретация результатов и считывания:
Визуальное наблюдение
|
|
Несоответствующий |
Анализ является НЕСООТВЕТСТВУЮЩИМ, если наблюдается любое из следующих:
· C полоса отсутствует
· C полоса размытая или неровная
· Проба заслоняет полосы C, BL (бета-лактама), или TE (тетрациклина).
Повторный анализ НЕСООТВЕТСТВУЮЩИХ проб. НЕ ИНТЕРПРЕТИРУЙТЕ ИЛИ НЕ ПОМЕЩАЙТЕ НЕСООТВЕТСТВУЮЩИЕ ИНДИКАТОРНЫЕ ПОЛОСКИ В СЧИТЫВАЮЩЕЕ УСТРОЙСТВО ROSA. |
|
|
Проверка считывающего устройства:
|
|
Результаты анализа MRLBLRFTET2 ДОЛЖНЫ БЫТЬ интерпретированы с применением считывающего устройства Rosa (EZ Reader или PEARL-X).
В течение 5 минут завершения анализа, вводят чистую и визуально годную индикаторную полоску в считывающее устройство ROSA как показано. Вставляют полностью в щель устройства.
Считывают результаты на TETR канале считывающего устройства ROSA в режиме 3-полосы/3 минуты*. По требованию вводят SAMPLE и/или ОPERATOR и нажимают ENTER. Численное значение (READING) и интерпретация (RESULT) отображаются на экране.
Результаты хранят в памяти и могут быть выведены и загружены на принтер или компьютер.
* Обращайтесь к считывающему устройству Charm ROSA (Pearl или Pearl-X) Инструкции по установке и эксплуатации. |
|
|
Отрицательный результат – Если READING является отрицательным числом или нулем, то считывающее устройство ROSA будет показывать на дисплее RESULT NEGATIVE. Сообщение в виде “Not Found”. |
|
Положительный результат - Если READING является положительным числом, то считывающее устройство ROSA будет показывать на дисплее RESULT POSITIVE. Проба должен быть перепроверен.
Смотрите «Перепроверка первоначального положительного». |
Подтверждение положительных результатов:
1. Анализируют пробы “Первоначально положительные” в двух экземплярах в т.ч. с одним отрицательным контролем и одним положительным контролем.
2. Отрицательный контроль должен быть RESULT NEGATIVE с READING менее (более отрицательны), чем -400 на считывающем устройстве ROSA.
3. Положительный контроль должен быть RESULT POSITIVE с READING более, чем +400 на считывающем устройстве ROSA.
4. Если этот или иной не находятся в пределах диапазона, то перезапускают анализ “первоначально положительной” с контролями. Если этот или иной контроли не находятся еще в пределах после перепроверки, не продолжайте анализа – обращайтесь в "Чарм Сайенсиз".
5. Если оба контроля находятся в пределах диапазона и этот или иной или обе перепроверенных пробы являются RESULT POSITIVE, проба является “бета-лактамом и/или положительным анализом на тетрациклин”.
